PCR yoki polimeraza zanjiri reaktsiyasi DNK ketma-ketligini kuchaytirish uchun ishlatiladigan usuldir.U birinchi marta 1980-yillarda o'z ishi uchun 1993 yilda kimyo bo'yicha Nobel mukofotiga sazovor bo'lgan Kari Mullis tomonidan ishlab chiqilgan.PCR molekulyar biologiyada inqilob qildi, bu tadqiqotchilarga kichik namunalardan DNKni kuchaytirish va uni batafsil o'rganish imkonini berdi.
PCR uch bosqichli jarayon bo'lib, termal siklatorda, reaksiya aralashmasining haroratini tez o'zgartira oladigan mashinada amalga oshiriladi.Uch bosqich - denaturatsiya, tavlanish va kengaytirish.
Birinchi bosqichda, denaturatsiyada, ikki zanjirli DNK yuqori haroratga (odatda 95 ° C atrofida) qizdirilib, ikkita ipni bir-biriga bog'lab turadigan vodorod aloqalarini uzadi.Natijada ikkita bitta zanjirli DNK molekulalari paydo bo'ladi.
Ikkinchi bosqichda, tavlanishda, primerlarning bir ipli DNKdagi to'ldiruvchi ketma-ketliklarga tavlanishiga imkon berish uchun harorat taxminan 55 ° C ga tushiriladi.Primerlar DNKning qisqa bo'laklari bo'lib, ular maqsadli DNKdagi qiziqishlar ketma-ketligiga mos kelish uchun mo'ljallangan.
Uchinchi bosqichda, kengaytmada, Taq polimeraza (DNK polimerazasining bir turi) primerlardan DNKning yangi zanjirini sintez qilishiga imkon berish uchun harorat 72 ° C atrofida ko'tariladi.Taq polimeraza issiq buloqlarda yashovchi va PCRda ishlatiladigan yuqori haroratga bardosh beradigan bakteriyadan olingan.
Bir PCR siklidan so'ng, natija maqsadli DNK ketma-ketligining ikki nusxasi bo'ladi.Bir qator tsikllar uchun (odatda 30-40) uchta bosqichni takrorlash orqali maqsadli DNK ketma-ketligining nusxalari sonini eksponent ravishda oshirish mumkin.Bu shuni anglatadiki, boshlang'ich DNKning kichik miqdori ham millionlab yoki hatto milliardlab nusxalarni ishlab chiqarish uchun kuchaytirilishi mumkin.
PCR tadqiqot va diagnostikada ko'plab ilovalarga ega.Genetikada genlar va mutatsiyalar funksiyasini oʻrganish, sud tibbiyotida DNK dalillarini tahlil qilish, yuqumli kasalliklar diagnostikasida patogenlar mavjudligini aniqlash va prenatal diagnostikada homiladagi irsiy kasalliklarni tekshirish uchun ishlatiladi.
PCR, shuningdek, DNK miqdorini o'lchash imkonini beruvchi miqdoriy PCR (qPCR) va RNK ketma-ketligini kuchaytirish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan teskari transkripsiyali PCR (RT-PCR) kabi bir qator o'zgarishlarda foydalanish uchun moslashtirilgan.
Ko'p qo'llanilishiga qaramay, PCR cheklovlarga ega.Bu maqsadli ketma-ketlikni va tegishli primerlarning dizaynini bilishni talab qiladi va agar reaktsiya shartlari to'g'ri optimallashtirilmagan bo'lsa, u xatolikka moyil bo'lishi mumkin.Biroq, ehtiyotkorlik bilan eksperimental loyihalash va bajarish bilan PCR molekulyar biologiyadagi eng kuchli vositalardan biri bo'lib qolmoqda.
Xabar vaqti: 22-fevral-2023-yil